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激光显微镜的组成、使用领域及优点

发布时间:2021-06-07 16:39 人气:

光学显微镜的主要组成:

(1)物镜物镜是决定显微镜性能的最重要部件,安装在物镜转换器上,接近被观察的物体,故叫做物镜或接物镜。物镜的放大倍数与其长度成正比。物镜放大倍数越大,物镜越长。

(2)目镜因为它靠近观察者的眼睛,因此也叫接目镜。安装在镜筒的上端。

(3)聚光器:聚光器也叫集光器。位于标本下方的聚光器支架上。它主要由聚光镜和可变光阑组成。其中,聚光镜可分为明视场聚光镜(普通显微镜配置)和暗视场聚光镜。

(4)反光镜:反光镜是一个可以随意转动的双面镜,直径为50mm,一面为平面,一面为凹面,其作用是将从任何方向射来的光线经通光孔反射上来。平面镜反射光线的能力较弱,是在光线较强时使用,凹面镜反射光线的能力较强,是在光线较弱时使用。

(5)照明光源:显微镜的照明可以用天然光源或人工光源

(6)滤光器:安装在光源和聚光器之间。作用是让所选择的某一波段的光线通过,而吸收掉其他的光线,即为了改变光线的光谱成分或削弱光的强度。分为两大类:滤光片和液体滤光器。

(7)盖玻片和载玻片:盖玻片和载玻片的表面应相当平坦,无气泡,无划痕。最好选用无色,透明度好的,使用前应洗净。盖玻片的标准厚度是0.17±0.02mm,如不用盖玻片或盖玻片厚度不合适,都会影响成像质量。载玻片的标准厚度是1.1±0.04mm,一般可用范围是1—1.2mm,若太厚会影响聚光器效能,太薄则容易破裂。

激光显微镜的使用领域

(1)共聚焦及双光子在现代生物学研究中有如下应用:

(2)多色荧光成像(Multi-color imaging),具有多磁道和双向扫描,曲线扫描等特性。

(3)三维重构(Three dimentional reconstruction)及定量分析。

(4)实时成像(Time series,real time imaging),可进行活细胞跟踪。

(5)离子成像(Ion imaging)/比率成像(Ratio imaging),可进行Ca2+,Mg2+,H+,Na+,K+,Zn2+,Ni2+,Fe2+,Hg2+,Pb2+及Cd2+等成像。

(6)荧光原位杂交(FISH:fluorescence in situ hybridization);

(7)荧光漂白恢复(FRAP:fluorescence recovery after photobleaching);

(8)荧光共振能量转移(FRETM:fluorescence resonance energy transfer;

(9)光生命期成像显微术(FLIM:fluorescence lifetime imaging microscopy)。

(10)荧光相关光谱(FCS:fluorescence correlation spectroscopy)。

激光显微镜的优点

(1)荧光标记的特异性及可定量性。

(2)共聚焦针孔的运用,有效的消除了焦平面上下散射光,提高轴向分辨率。

(3)点光源激光的应用,对荧光素能达到有效的激发,激发的特异性高,降低对荧光的淬灭,增强侧向分辨率。

(4)双光子的应用,相对较低平均功率的红外激发,大大减低对活细胞的损伤;荧光激发高度聚焦在焦点处,可避免了焦点以外的光漂白(Photobleaching)和光毒(cytotoxicity)作用,延长观察时间,是目前用于活细胞跟踪的最理想方法。

(5)脉冲激光散射和吸收程度小,透射性强,对厚样品的穿透可达400um,是对厚的组织分析的最首先方法。

(6)结合META新技术,尤其对荧光蛋白成像具有更方便,更精确的效果。

标签: 显微镜

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